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细胞培养“伴侣”:细胞冻存液

发布日期:2021-07-31 信息来源: ExCell/依科赛

“穿戴好手部和面部的防护用品,我们打开液氮罐,液氮气化形成的白雾从罐体开口往下缓缓流淌。向罐体中看去,似乎能感受到接触空气的液氮液面正在巨大的温差下沸腾。无数细胞就像生命的种子,在目光触及不到的低温液体内沉睡。我们尽可能迅速的取出早已被标记好的细胞冻存管。迅速水浴解冻后经过一系列操作,细胞就完成了从休眠状态到活跃状态的转换,此后我们只能祈祷苏醒后的细胞们能尽快恢复正常的生命活动。”

对于大部分有细胞培养经历的小伙伴来说,闭上眼睛就能回忆起完整的细胞冻存和复苏全流程。可能细胞冻存阶段给我们的印象主要是-80℃冰箱和液氮罐,而直接陪伴细胞进入低温冷冻“梦乡”的冻存液则往往存在感不高。那这类常得不到重视的细胞冻存液试剂,究竟其作用是什么?


细胞冻存液的门道

细胞实验老手们都了解,细胞冷冻讲究一个“慢冻速融”。传统的操作流程是将细胞用冻存液重悬后分装到冻存管内,然后再缓慢的降温到-80℃,而后转入液氮罐长期保存。其中冻存液的主要功能就是防止冷冻过程中形成会损伤细胞的冰晶,同时在长期冷冻和解冻过程中为细胞提供支持成分。市面上有众多商品化的细胞冻存液产品,而也有人在坚持使用自行配制的冻存液。细胞冻存液真的会对细胞的保存和复苏产生重要影响吗?事实上,使用不同的冻存液保存细胞,其结果可能大不相同。


“原始”的细胞冻存液提示了哪些信息?

如果需要冻存的细胞属于常用的细胞系,很多实验室会选择自行配制冻存液来使用。典型的配方是在基础培养基中加入5%到10%的DMSO(二甲基亚砜)和5%到40%的血清。甚至有90%血清+10%DMSO的配方。
DMSO是一种渗透性保护剂,能够降低细胞冰点,减少冰晶的形成,防止冷冻过程对细胞造成不可逆的机械性损伤。血清中的白蛋白是一种关键的组分,可在细胞周围形成保护层。当细胞开始解冻时,血清也可以与释放的毒素相结合。当在营养丰富的环境中被冻存,细胞也往往更容易在解冻后恢复状态。除了DMSO和血清,冻存液中通常含有的基础培养基也有维持渗透压、补充血清中含量不足的某些营养成分等作用。
这些成分的组合使自配的冻液具备了保护细胞免受冰晶损伤、营养支持和化学性保护等基本功能,使得细胞长期冷冻保存成为可能。但是,细心的你会发现:自行配制的冻存液用于冻存某些敏感的细胞(如干细胞等)后很难正常复苏,甚至部分生命力旺盛的细胞系在复苏后也会出现形态和增殖速度方面的问题。这会和冻存液有关吗?


自配的冻存液有哪些潜在风险?

自配的培养液几乎都会含有血清和DMSO这两种物质。血清,我们知道它实际上是一种来自动物体内的天然复合物,其批次间差异不可能完全避免。解冻后细胞的活力可能因冻存液中血清批次的不同而有差异。相比于永生化的细胞系,原代细胞更敏感从而更容易受到这方面影响。对于多能干细胞(PSC),血清中的某些成分可能导致它们分化,并且不是朝着你期望的方向。DMSO虽然在一定条件下能保护细胞,但它本身是有毒的,同时DMSO也会改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。一些脆弱的细胞也会因为DMSO的存在更难以在复苏后恢复状态。虽然自配的冻存液相对廉价,但因为长期实验的可靠性需求,以及冻存中的细胞库的宝贵性,越来越多的细胞培养人员会更倾向于使用可靠的商品化细胞冻存液。


有没有可靠的商品化冻存液选择?

为了帮助更多用户解决细胞冻存过程中的麻烦,依科赛推出了一系列化学成分明确、经过严密的性能验证实验的即用型细胞冻存液产品。
一、CD款
OptiVitro 无蛋白,CD细胞冻存液
Cat#UC000-N011、UC000-N021
适用于:多种哺乳动物细胞低温冷冻保存的即用型冻存液,无外源污染风险。


二、经典款

OptiVitro 无血清细胞冻存液
Cat#VUC00-N011
适用于:多种哺乳动物细胞低温冷冻保存的即用型冻存液,普适性更强。


三、无DMSO款

OptiVitro 无DMSO细胞冻存液
Cat#UC000-N031

适用于:包括多种干细胞在内的贴壁细胞冻存的即用型细胞冻存液。


产品信息