支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物,估计有15%~35%的细胞被支原体污染。支原体污染会对细胞造成多方面的影响,包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变,影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性;支原体难以检测,同时也很难消除,其能轻易地通过0.22μm标准滤膜,同时也能拮抗绝大多数的抗生素,给细胞培养造成巨大损失。因此细胞都需要定期(如每2~3个月)进行支原体污染的检测。许多方法可用于检测支原体,包括肉汤或琼脂培养,直接或间接的荧光染色、ELISA、直接或间接的PCR法等,其中,直接PCR法灵敏度高。 为保证PCR结果的准确性,要预防非特异性PCR扩增和污染,常用的措施是采用热启动Taq酶和UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)。 化学修饰Taq酶活性中心被封闭,使得该酶在低温或常温没有活性,因此在加样至PCR扩增前,不会产生由于引物错误配对而形成的非特异性扩增。高温(如95℃)条件下,化学修饰基团会水解脱落,释放全部酶活性,从而实现Taq酶的热启动。最大程度降低非特异扩增和引物二聚体的形成,提高扩增灵敏度和特异性。 UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能选择性水解断裂含有dU的单链或双链 DNA中的尿嘧啶糖苷键,形成有缺失碱基的DNA链,在碱性条件及高温下会进一步水解断裂,从而被消除。本产品选择UDG酶,最佳活性温度为50℃,95℃灭活。 本产品含有化学修饰热启动酶的2×PCR mix,配以dUTP和UDG酶,可最大程度降低非特异扩增和引物二聚体的形成,有效防止PCR产物的交叉污染。同时在PCR管中预先加入上样Loading Dye成份,使PCR前加样处理及后续电泳上样变的更方便,以达到准确检测支原体污染,重复性好,可信度高。
Components MB000-1591 MB000-1592 8-cap strips with Loading Dye 6 12 Cell lysis buffer 5 ML 5 ML×2 Control template 50μL 50μL 2×EasyHotStart UDG PCR Master Mix 0.75 ML 1.5 ML Sterial ddH2O 1.5 ML 1.5 ML 保存条件:-20℃。 有效期:一年。 运输条件:干冰运输。
本试剂盒能检测支原体种类包括 M. Hyorhinis, M. Arginini, M.Orale, M. Fermentans, A.laidlawii等常见支原体,这5种支原体代表了98%以上的细胞支原体污染。同时还能检测Mycoplasma, Acholeplasma, Ureaplasma, Spiroplasma等种属。
Q:OptiVitro® 无血清细胞冻存液 UC04(UC000-N056) A:无血清细胞冻存液UC04,是一款普遍适用于多种哺乳动物细胞低温冷冻保存的即用型细胞冻存 液,经验证本品适用于外周血单核细胞(PBMC)、T 细胞、NK 细胞、间充质干细胞(MSC)等多种类 型细胞的冻存。本品无血清,无蛋白,无异源体,成分简单、明确,能够保持多种细胞的复苏活率可达 到 90%以上。 Q:OptiVitro®无蛋白,CD细胞冻存液(UC000-N011) A:OptiVitro 无蛋白,CD细胞冻存液(Protein-free, Chemical Defined Cell Cryopreservation Medium), 是一款普遍适用于多种哺乳动物细胞低温冷冻保存的即用型细胞冻存液,经验证本品适用于人间充质干 细胞(hMSC)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、外周血单核细胞(PBMC)、人胚肾细胞(HEK293)、 非洲绿猴肾细胞(Vero)等类型细胞的冻存。本品化学成分明确,不含有任何蛋白成分,可排除血清或 蛋白潜在的病原体或免疫反应风险,使用更安全,并能够保持多种细胞的复苏活率在 90%以上。 Q:OptiVitro® 无血清细胞冻存液(VUC00-N011) A:OptiVitro®无血清细胞冻存液(Serum-free Cell Cryopreservation Medium),是一款适用于多种哺乳动物 细胞低温冷冻保存的即用型细胞冻存液。经验证本品适用于人间充质干细胞(hMSC)、中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)、外周血单核细胞(PBMC)、人胚肾细胞(HEK293)、非洲绿猴肾细胞(Vero)等类型细胞的冻存。 本品无须进行额外配制,使用简单,细胞冻存后复苏的回收率和存活率高,可完美替代传统的含血清冻存液。